簡(jiǎn)要描述:LeapWal PolyShooter 蛋白轉(zhuǎn)染試劑,產(chǎn)品編碼:P19103。它有兩種規(guī)格:0.3ML、1.5ML。是一種基于陽(yáng)離子高分子聚合物的新型蛋白轉(zhuǎn)染試劑,對(duì)多種常見細(xì)胞具有高水平轉(zhuǎn)染效率,適用于幾百Da的小分子多肽到幾百kDa的大分子蛋白質(zhì)及各種理化性質(zhì)的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)染。
詳細(xì)介紹
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),綜合 |
LeapWal PolyShooter 蛋白轉(zhuǎn)染試劑,產(chǎn)品編碼:P19103。
LeapWal PolyShooter 蛋白轉(zhuǎn)染試劑,
PolyShooterTM Protein
Transfection Reagent
For the transfection of biologically active proteins and peptides.
Catalog Number:P19103
01/產(chǎn)品概述
蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)染是將生物學(xué)上有活性的蛋白質(zhì)或肽段導(dǎo)入活細(xì)胞,通過(guò)替換體內(nèi)具有缺陷或缺失的蛋白而發(fā)揮治療作用的新型手段。與傳統(tǒng)小分子化合物藥物相比,蛋白質(zhì)藥物具有更強(qiáng)的特異性和效用,在低濃度時(shí)就可以表現(xiàn)出高特異性和高活性。此外,在活細(xì)胞內(nèi)遞送蛋白質(zhì)能夠獲得比基因轉(zhuǎn)染更迅速的蛋白表達(dá),是核酸轉(zhuǎn)染的替代方式,可作為一種功能強(qiáng)大的研究方法或治療策略,廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)領(lǐng)域。
基于肽轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域(PTD)的技術(shù)已成功開發(fā)用于蛋白質(zhì)的胞內(nèi)轉(zhuǎn)染。然而,這些PTD與蛋白質(zhì)的相互作用較差,通常需要蛋白質(zhì)和PTD之間形成共價(jià)連接。目前已開發(fā)出多種試劑用于蛋白質(zhì)的胞內(nèi)轉(zhuǎn)染,如基于多肽、陽(yáng)離子脂質(zhì)和聚合物的轉(zhuǎn)染試劑。這些轉(zhuǎn)染試劑主要是通過(guò)非共價(jià)相互作用與蛋白質(zhì)形成復(fù)合物,然后通過(guò)胞吞作用進(jìn)入細(xì)胞,這些蛋白質(zhì)復(fù)合物通常會(huì)進(jìn)入內(nèi)涵體中,如果不能及時(shí)從內(nèi)涵體中釋放,蛋白質(zhì)就會(huì)在內(nèi)涵體發(fā)展成為溶酶體后,在溶酶體中發(fā)生降解。因此,轉(zhuǎn)染試劑應(yīng)該有很強(qiáng)的破膜活性,從而保證轉(zhuǎn)染蛋白能夠從內(nèi)涵體中釋放進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)并發(fā)揮作用。
PolyShooterTM Protein Transfection Reagent是一種基于陽(yáng)離子高分子聚合物的新型蛋白轉(zhuǎn)染試劑,適用于幾百Da的小分子多肽到幾百kDa的大分子蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)染。其原理為帶正電的陽(yáng)離子高分子轉(zhuǎn)染試劑與蛋白質(zhì)通過(guò)靜電相互作用、疏水相互作用以及氫鍵相互作用等多種非共價(jià)相互作用的協(xié)同作用與蛋白質(zhì)結(jié)合形成帶正電的復(fù)合物,之后與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用,并通過(guò)內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞。在內(nèi)涵體熟化過(guò)程中,隨著pH值的降低,陽(yáng)離子高分子轉(zhuǎn)染試劑與內(nèi)涵體膜的相互作用增加,導(dǎo)致內(nèi)涵體膜的破裂,從而將蛋白質(zhì)釋放入細(xì)胞質(zhì)中發(fā)揮作用。由于轉(zhuǎn)染試劑通過(guò)非共價(jià)形式與蛋白質(zhì)結(jié)合形成復(fù)合物,因此不會(huì)干擾蛋白質(zhì)的生物學(xué)活性。
PolyShooterTM Protein Transfection Reagent對(duì)多種常見細(xì)胞具有高水平轉(zhuǎn)染效率,具有高效低毒、操作簡(jiǎn)單、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。另外,由于該陽(yáng)離子高分子轉(zhuǎn)染試劑與蛋白質(zhì)是通過(guò)多種非共價(jià)相互作用協(xié)同結(jié)合蛋白質(zhì)的,因此可以適用于各種理化性質(zhì)的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)染。PolyShooterTM Protein Transfection Reagent可用于細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)和凋亡檢測(cè)、蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用、蛋白質(zhì)定位和隔室穿梭等各種功能研究。
02/產(chǎn)品組分
組分 | P19103-01 | P19103-05 |
PolyShooterTM Protein Transfection Reagent | 0.3 mL/支 | 0.3 mL x 5支 |
03/保存條件
冰袋(wet ice)運(yùn)輸。4℃保存,有效期6個(gè)月。-30℃至-10℃保存,有效期12個(gè)月,避免反復(fù)凍融。
04/產(chǎn)品特點(diǎn)
理想的蛋白轉(zhuǎn)染效率——針對(duì)廣泛類型的細(xì)胞,均表現(xiàn)出理想的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)染效率
蛋白活性高——與蛋白質(zhì)非共價(jià)結(jié)合,遞送后的蛋白和肽仍具有高生物學(xué)活性
細(xì)胞毒性低——作用溫和,生物相容性好
操作簡(jiǎn)單——簡(jiǎn)單快速的實(shí)驗(yàn)方案,無(wú)需分離、克隆和轉(zhuǎn)染基因序列;孵育后3-12小時(shí)內(nèi)可獲得穩(wěn)定的蛋白轉(zhuǎn)染效果
適用范圍廣——適用于各種理化性質(zhì)的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)染
05/適用范圍
PolyShooterTM Protein Transfection Reagent是一種基于陽(yáng)離子高分子聚合物的新型蛋白轉(zhuǎn)染試劑,對(duì)多種常見細(xì)胞具有高水平轉(zhuǎn)染效率,適用于幾百Da的小分子多肽到幾百kDa的大分子蛋白質(zhì)及各種理化性質(zhì)的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)染。
06/實(shí)驗(yàn)流程概要
07/實(shí)驗(yàn)步驟(以24孔板為例,其他培養(yǎng)板加樣體積參考表一:轉(zhuǎn)染量度標(biāo)準(zhǔn))
1: 準(zhǔn)備待轉(zhuǎn)染細(xì)胞
貼壁細(xì)胞:轉(zhuǎn)染前一天,將胰酶消化后的細(xì)胞按照每孔1-3x105個(gè)細(xì)胞的量進(jìn)行鋪板,使其在轉(zhuǎn)染時(shí)密度為50%-100%。
懸浮細(xì)胞:轉(zhuǎn)染當(dāng)天,配制轉(zhuǎn)染試劑-蛋白質(zhì)復(fù)合物之前,在24孔板中進(jìn)行細(xì)胞鋪板,每500 µL生長(zhǎng)培養(yǎng)基中加入2-6x105個(gè)細(xì)胞。
? 細(xì)胞狀態(tài)會(huì)極大影響轉(zhuǎn)染效率,待轉(zhuǎn)染細(xì)胞應(yīng)處于良好生長(zhǎng)狀態(tài),建議使用生長(zhǎng)處于指數(shù)期、存活率大于90% 的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。
2: 準(zhǔn)備PolyShooterTM Protein轉(zhuǎn)染試劑-蛋白質(zhì)復(fù)合物
(1)取1-10 μg 蛋白質(zhì)加入到1.5 mL離心管中,加入1-3 μL PolyShooterTM Protein轉(zhuǎn)染試劑與蛋白質(zhì)混合,室溫孵育3分鐘。
? 蛋白質(zhì)的實(shí)際使用量需根據(jù)蛋白質(zhì)的類型和具體實(shí)驗(yàn)進(jìn)行優(yōu)化,不同性質(zhì)的蛋白質(zhì)使用量相差較大,例如:熒光蛋白EGFP建議24孔板使用量為5-10 μg,熒光蛋白Phycoerythrin建議24孔板使用量為0.5-2 μg,凋亡蛋白Saporin建議24孔板使用量為0.1-1 μg。
? 轉(zhuǎn)染試劑的用量應(yīng)根據(jù)目的細(xì)胞類型、接種細(xì)胞密度、培養(yǎng)皿的大小進(jìn)行調(diào)整,請(qǐng)參見表一。
(2)往上述混合物中加入100 μL無(wú)血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基1(與培養(yǎng)體系一致,且無(wú)血清無(wú)雙抗),輕輕混勻,在室溫下靜置20分鐘,形成轉(zhuǎn)染試劑-蛋白質(zhì)復(fù)合物。
(3)20分鐘后,往轉(zhuǎn)染試劑-蛋白質(zhì)復(fù)合物中加入400 μL無(wú)血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基2(與培養(yǎng)體系一致,且無(wú)血清無(wú)雙抗)稀釋復(fù)合物。
3: 蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)染
棄去細(xì)胞培養(yǎng)基,用預(yù)熱的PBS清洗細(xì)胞1-2次,將上述500 µL轉(zhuǎn)染試劑-蛋白復(fù)合物加入每孔細(xì)胞進(jìn)行蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)染。
4. 分析蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)染效果
轉(zhuǎn)染試劑-蛋白復(fù)合物與細(xì)胞孵育3-12小時(shí)后,可根據(jù)實(shí)際情況,用熒光檢測(cè)法、流式細(xì)胞術(shù)、Western Blot、免疫熒光染色等實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行后續(xù)檢測(cè)及分析。
表一:轉(zhuǎn)染量度標(biāo)準(zhǔn)
細(xì)胞培養(yǎng)裝置 | 生長(zhǎng)培養(yǎng)基體積 (mL) | 蛋白轉(zhuǎn)染試劑 (μL) | 無(wú)血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基體積1 (μL) | 無(wú)血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基體積2 (μL) |
96孔板 | 0.1 | 0.2-0.6 | 20 | 80 |
24孔板 | 0.5 | 1-3 | 100 | 400 |
12孔板 | 1 | 2-6 | 200 | 800 |
6孔板 | 2 | 4-12 | 400 | 1600 |
60 mm培養(yǎng)皿 | 4 | 8-24 | 800 | 3200 |
100 mm培養(yǎng)皿 | 10 | 20-60 | 2000 | 8000 |
08/注意事項(xiàng)
1. 蛋白質(zhì)質(zhì)量:蛋白質(zhì)中存在的雜質(zhì)、污染物和添加劑都可能會(huì)影響蛋白質(zhì)遞送效率,我們建議使用盡可能高純度的蛋白質(zhì)樣品。
2. 細(xì)胞質(zhì)量:細(xì)胞狀態(tài)會(huì)極大影響轉(zhuǎn)染效率,建議使用生長(zhǎng)處于指數(shù)期、存活率大于90%的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。
3. 細(xì)胞密度:建議細(xì)胞傳代后12-24 h內(nèi)、細(xì)胞密度為50%-100% 時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染。不同的蛋白轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn),對(duì)細(xì)胞密度的要求不盡相同。在進(jìn)行不同蛋白質(zhì)或不同細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染時(shí),需要根據(jù)說(shuō)明書再次優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件。此外,在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需保證相同的接種條件,確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可重復(fù)性。
4.蛋白質(zhì)與轉(zhuǎn)染試劑使用量:蛋白質(zhì)的實(shí)際使用量需根據(jù)蛋白質(zhì)的類型和具體實(shí)驗(yàn)進(jìn)行優(yōu)化,不同性質(zhì)的蛋白質(zhì)使用量相差較大。轉(zhuǎn)染試劑的用量應(yīng)根據(jù)目的細(xì)胞類型、接種細(xì)胞密度、培養(yǎng)皿的大小進(jìn)行調(diào)整(參見表一)。想要獲得理想的蛋白遞送效果,需對(duì)蛋白質(zhì)及轉(zhuǎn)染試劑的使用量進(jìn)行優(yōu)化,選擇適合的劑量。
5. 采用無(wú)血清轉(zhuǎn)染體系進(jìn)行蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)染可獲得高效的蛋白質(zhì)遞送效果,這是因?yàn)檠逯械难宓鞍讜?huì)通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合蛋白轉(zhuǎn)染試劑,從而影響轉(zhuǎn)染試劑-蛋白質(zhì)復(fù)合物的形成和穩(wěn)定性。
6. 由于一些特殊培養(yǎng)基中的某些成分可能會(huì)抑制陽(yáng)離子聚合物介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染,因此有必要檢測(cè)特殊培養(yǎng)基與PolyShooterTM Protein Transfection Reagent的相容性。
7. 為了您的健康安全,請(qǐng)規(guī)范操作,穿戴實(shí)驗(yàn)服與手套開展實(shí)驗(yàn)。
8. 本產(chǎn)品僅供科研使用,請(qǐng)勿用于臨床診斷及治療。
09/實(shí)驗(yàn)案例分析
1: 轉(zhuǎn)染前一天,將CHO、NIH-3T3、H1299和HEK293細(xì)胞分別接種于24孔板,使其在轉(zhuǎn)染時(shí)密度約為95%。
2: 按照每孔計(jì)量,取10 μg EGFP(1mg/mL)蛋白加入到1.5 mL離心管中,再分別加入1 μL、2 μL、3 μL PolyShooterTM Protein Transfection Reagent與蛋白質(zhì)混合,室溫孵育3 min。
3: 往混合物中加入100 μL無(wú)血清基礎(chǔ)DMEM培養(yǎng)基,輕輕混勻,在室溫下靜置20 min,形成轉(zhuǎn)染試劑-蛋白質(zhì)復(fù)合物。
4: 20分鐘后,往復(fù)合物中加入400 μL無(wú)血清基礎(chǔ)DMEM培養(yǎng)基稀釋復(fù)合物。
5: 棄去細(xì)胞培養(yǎng)基,用預(yù)熱的PBS清洗細(xì)胞2次,將上述500 µL轉(zhuǎn)染試劑-蛋白質(zhì)復(fù)合物加入每孔細(xì)胞,與細(xì)胞孵育4小時(shí)。
6: 轉(zhuǎn)染4小時(shí)后,用熒光顯微鏡檢測(cè)EGFP綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)染效果,實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2所示。
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