簡(jiǎn)要描述:LeapWal ViralStars 慢病毒濃縮試劑(5x),產(chǎn)品編碼:LC110R。是針對(duì)慢病毒富集而優(yōu)化的聚合物材料,它提供了一種簡(jiǎn)單、快速、高效的慢病毒顆粒濃縮方法。使用本產(chǎn)品進(jìn)行病毒濃縮后,病毒滴度可提高10-100倍,病毒回收率最高可達(dá)約90%,病毒損失少,并且病毒在濃縮過程中能保持病毒生物活性。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程可在 4 小時(shí)內(nèi)快速完成,無(wú)需超速離心。
詳細(xì)介紹
品牌 | 其他品牌 | 貨號(hào) | LC110R |
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),綜合 |
LeapWal ViralStars 慢病毒濃縮試劑(5x),產(chǎn)品編碼:LC110R。
LeapWal ViralStars 慢病毒濃縮試劑(5x)
ViralStarsTM LC
Lentivirus Concentration Solution
(5x)
Catalog Number:LC110R
01/產(chǎn)品概述
基于人類免疫缺陷病毒-1(HIV-1)的慢病毒載體是一種用于基因轉(zhuǎn)移研究的載體。慢病毒載體可以將外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色體上,從而達(dá)到持久性表達(dá)目的序列的效果。在感染能力方面,慢病毒載體可有效地感染神經(jīng)元細(xì)胞、肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、干細(xì)胞等多種類型的細(xì)胞。對(duì)于一些較難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,如原代細(xì)胞、干細(xì)胞、不分化的細(xì)胞等,使用慢病毒載體能大大提高目的基因或目的shRNA的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率,且目的基因或目的shRNA整合到宿主細(xì)胞基因組的幾率大大增加,能夠比較方便快捷地實(shí)現(xiàn)目的基因或目的shRNA的長(zhǎng)期、穩(wěn)定表達(dá)。在體外實(shí)驗(yàn)及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的研究中,慢病毒己經(jīng)成為表達(dá)外源基因或外源shRNA的常用載體形式之一,并且正在獲得越來越廣泛的應(yīng)用。
ViralStars LC Lentivirus Concentration Solution慢病毒濃縮試劑是針對(duì)慢病毒富集而優(yōu)化的聚合物材料,它提供了一種簡(jiǎn)單、快速、高效的慢病毒顆粒濃縮方法。只需將慢病毒上清液與慢病毒濃縮試劑按比例混合,短時(shí)間孵育,采用標(biāo)準(zhǔn)離心機(jī)進(jìn)行離心即可得到慢病毒顆粒沉淀。超濾、超速離心法等病毒濃縮法,操作時(shí)間長(zhǎng),步驟繁瑣,且通常會(huì)有細(xì)胞碎片和血清蛋白等的污染,病毒純度低。使用本產(chǎn)品進(jìn)行病毒濃縮后,病毒滴度可提高10-100倍,病毒回收率最高可達(dá)約90%,病毒損失少,并且病毒在濃縮過程中能保持病毒生物活性。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程可在 4 小時(shí)內(nèi)快速完成,無(wú)需超速離心即可獲得出色的回收效率。
02/產(chǎn)品組分
03/保存條件
冰袋(wet ice)運(yùn)輸。4℃ 保存,有效期12 個(gè)月。
04/產(chǎn)品特點(diǎn)
* 簡(jiǎn)單快速——操作簡(jiǎn)單,無(wú)需超速離心,確?;钚?,實(shí)驗(yàn)耗時(shí)不超過4小時(shí)
* 濃縮效果優(yōu)——病毒滴度可濃縮10-100倍以上(Transduction Units/mL)
* 回收效率高——慢病毒回收效率高達(dá) 90% 以上
* 應(yīng)用范圍廣——適用于所有類型的慢病毒顆粒
05/實(shí)驗(yàn)流程概要
06/實(shí)驗(yàn)步驟
1. 將含有慢病毒顆粒的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至無(wú)菌容器中,300xg離心10分鐘以除去細(xì)胞碎片。
? 為保證病毒活性,濃縮前的病毒上清液應(yīng)盡量選擇新鮮收集的病毒原液。
2. 使用0.22μm過濾器過濾上清液至無(wú)菌容器中。
? 如果使用濾膜過濾,推薦使用低蛋白結(jié)合力的纖維素醋酸酯或聚醚砜(PES)膜,不推薦使用硝酸纖維素膜(NC)。
3. 向每4體積含慢病毒的上清液中加入1體積慢病毒濃縮試劑(5x),使慢病毒濃縮試劑(5x)稀釋為工作濃度(1x)。
4. 將上述混合物于4℃ 搖床中慢速孵育3小時(shí)或過夜。
? 慢病毒顆粒在 4℃ 可穩(wěn)定長(zhǎng)達(dá)4天。
5. 將混合物4℃ 4000 x g 離心25分鐘。離心后,慢病毒顆??赡茉谌萜鞯撞匡@示為米色或白色沉淀。
6. 小心棄去上清液,4℃ 4000 x g 離心5分鐘,再次棄盡殘余液體,應(yīng)盡量避免吸走沉淀物,該沉淀物即為慢病毒顆粒。
7. 用初始體積(原上清液體積)1/10 -1/100 預(yù)冷的慢病毒保存液重懸病毒顆粒,使用移液器小心吹打,重懸慢病毒顆粒。
? 重懸病毒沉淀時(shí),吹打操作要輕柔,可選擇慢病毒保存液(LS110R)、*培養(yǎng)基或FBS重懸慢病毒。
8. 小體積分裝慢病毒,儲(chǔ)存于 -80℃ 冰箱或液氮中,留取少量病毒測(cè)定滴度。
? 應(yīng)盡量避免慢病毒反復(fù)凍融,否則會(huì)降低病毒滴度。
07/適用范圍
適用于任何慢病毒顆粒的濃縮方法。
08/注意事項(xiàng)
1. 為了您的健康安全,請(qǐng)規(guī)范操作,穿戴實(shí)驗(yàn)服與手套開展實(shí)驗(yàn);
2. 所有慢病毒操作均需在BSL2級(jí)生物安全柜中進(jìn)行;
3. 本產(chǎn)品僅供科研使用,請(qǐng)勿用于臨床診斷及治療。
09/實(shí)驗(yàn)案例分析
1. 使用10cm細(xì)胞培養(yǎng)皿培養(yǎng)ViralStars Lentivirus Packaging Cell Line(CL110001),待細(xì)胞密度為60-70%左右開始包裝慢病毒;
2. 使用ViralStars LP Lentivirus Packaging Kit(LP110-10)進(jìn)行慢病毒包裝(陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒含GFP綠色熒光蛋白基因),具體包裝步驟按照說明書進(jìn)行;
3. 準(zhǔn)備目的細(xì)胞:將需感染的目的細(xì)胞293T以(1-3)x104的密度接種于96孔板內(nèi),次日即可進(jìn)行慢病毒感染;
4. 待病毒包裝48h后,收集慢病毒上清液約9mL,300xg離心10分鐘以除去細(xì)胞碎片,使用0.22μm過濾器過濾上清液至無(wú)菌容器中。
5. 取1mL病毒上清液作為濃縮前對(duì)照1*,剩余8mL病毒上清液中加入2mL本產(chǎn)品進(jìn)行慢病毒濃縮,具體慢病毒濃縮步驟按照說明書進(jìn)行,保留1mL濃縮后應(yīng)棄去的上清液作為對(duì)照2#,使用800μL ViralStars LS Lentivirus Storage Solution(LS110R)輕輕重懸慢病毒顆粒,即可得到濃縮10倍的慢病毒;
6. 慢病毒感染目的細(xì)胞:將96孔板細(xì)胞棄去上清,每孔加入新鮮培養(yǎng)基100μL,Polybrene(LE110-01)0.2μL,濃縮后慢病毒100μL或?qū)φ?*(濃縮前慢病毒原液)100μL或?qū)φ?#(濃縮后應(yīng)棄去的慢病毒上清液)100μL;
7. 繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞48h后,使用熒光顯微鏡觀察綠色熒光強(qiáng)度,實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2所示。
圖2: 慢病毒感染目的細(xì)胞293T觀察GFP表達(dá)情況。(左)濃縮10x慢病毒,(中)對(duì)照1*(濃縮前慢病毒原液),(右)對(duì)照2#(濃縮后應(yīng)棄去的慢病毒上清液)。
10/其他相關(guān)產(chǎn)品
國(guó)內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理。
國(guó)外試劑的訂購(gòu)??商峁W美實(shí)驗(yàn)室品牌的采購(gòu)方案。
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