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當(dāng)前位置:首頁(yè) > 產(chǎn)品中心 > 實(shí)驗(yàn)試劑 > 其他試劑 > LE110Polybrene 聚凝胺 10mg/mL

Polybrene 聚凝胺 10mg/mL

簡(jiǎn)要描述:Polybrene 聚凝胺 10mg/mL,產(chǎn)品編碼:LE110。
它有兩種規(guī)格:0.5ML、2.5ML。
以溶液形式提供,粉末用 0.9% NaCl 配制成10 mg/mL的溶液,并用0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌。使用時(shí)一般按1:1000-1:5000稀釋,依細(xì)胞種類不同稀釋比例不同,具體使用濃度請(qǐng)查閱相關(guān)文獻(xiàn)。

  • 產(chǎn)品型號(hào):LE110
  • 廠商性質(zhì):代理商
  • 更新時(shí)間:2024-11-12
  • 訪  問(wèn)  量:554

詳細(xì)介紹

品牌其他品牌供貨周期現(xiàn)貨
應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),綜合


Polybrene 聚凝胺 10mg/mL,產(chǎn)品編碼:LE110。

Polybrene 聚凝胺 10mg/mL,

Polybrene (10 mg/mL)


01/產(chǎn)品概述


Polybrene(聚凝胺,hexadimethrine bromide)是一種多聚陽(yáng)離子聚合物,廣泛用于逆轉(zhuǎn)錄病毒及慢病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染,是一種常用的促感染試劑,能夠顯著提高病毒與細(xì)胞的接觸及感染效率,其作用機(jī)理可能是通過(guò)中和細(xì)胞表面唾液酸與病毒顆粒之間的靜電排斥從而促進(jìn)吸附作用。同時(shí),Polybrene也常用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的DNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)以增強(qiáng)脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染效率。Polybrene也是一種有名的抗肝素劑(肝素拮抗劑),常用來(lái)生產(chǎn)非特異性凝集的紅細(xì)胞。它還參與到低分子量DNA的轉(zhuǎn)化中。此外,Polybrene也多用于蛋白測(cè)序,因?yàn)樾┝康腜olybrene在自動(dòng)測(cè)序分析可明顯改善多肽的降解現(xiàn)象。PVDF膜加入polybrene還能提高膜的親和性。


Polybrene 聚凝胺 10mg/mL


本產(chǎn)品以溶液形式提供,粉末用 0.9% NaCl 配制成10 mg/mL的溶液,并用0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌。使用時(shí)一般按1:1000-1:5000稀釋,依細(xì)胞種類不同稀釋比例不同,具體使用濃度請(qǐng)查閱相關(guān)文獻(xiàn)。





02/產(chǎn)品組分


Polybrene 聚凝胺 10mg/mL



03/保存條件



冰袋(wet ice)運(yùn)輸。-20℃ 保存,有效期24個(gè)月。建議分裝保存,避免反復(fù)凍融。




04/產(chǎn)品特點(diǎn)


v 即用型試劑,無(wú)需進(jìn)行試劑配置,簡(jiǎn)單方便。

v 無(wú)菌制劑,可直接加入細(xì)胞使用。





05/實(shí)驗(yàn)步驟


慢病毒感染(Lentiviral Infection)實(shí)驗(yàn)步驟如下:

1. 包裝慢病毒并測(cè)定慢病毒滴度,通過(guò)病毒滴度和MOI計(jì)算目的細(xì)胞感染所需的病毒量。

2. 實(shí)驗(yàn)前一天,將生長(zhǎng)狀態(tài)良好的目的細(xì)胞消化計(jì)數(shù)后稀釋至1-3×105/mL,加入12孔板,1 mL/孔。放入37℃,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

? 懸浮細(xì)胞不需要提前一天接種,實(shí)驗(yàn)前將細(xì)胞計(jì)數(shù)接種后,直接加入病毒混合液即可。

3. 配制慢病毒+polybrene+培養(yǎng)基混合液。polybrene一般使用濃度為2-10 μg/mL,但對(duì)某些細(xì)胞(如末端分化的神經(jīng)元,DC細(xì)胞等)毒性較大,初次使用建議先做毒性測(cè)試。

4. 吸去12孔板中目的細(xì)胞的培養(yǎng)基,加入3中配制的慢病毒混合液,放入37℃,5% CO2 培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

? 感染懸浮細(xì)胞或半懸浮細(xì)胞,則需采用平角離心轉(zhuǎn)染法,即將適量的病毒液加入細(xì)胞培養(yǎng)板后,封好口,放入平角離心機(jī)中,低速(200xg)離心?1 h?,然后放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

? 若實(shí)驗(yàn)條件有限,沒有平角離心機(jī),可用離心管代替,將細(xì)胞吸入離心管中,進(jìn)行低速離心,去掉大部分上清,加入適量的病毒液,室溫放置?15 min,然后將細(xì)胞和病毒液同時(shí)吸出轉(zhuǎn)入培養(yǎng)板中繼續(xù)培養(yǎng)。

5. 病毒感染16 h后更換為新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

6. 病毒感染36-48 h后,可加入篩選培養(yǎng)基進(jìn)行穩(wěn)定細(xì)胞株篩選,或采用熒光顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、western blot、qPCR等方法檢測(cè)目的基因表達(dá)情況。




06/適用范圍


Polybrene目前廣泛用于逆轉(zhuǎn)錄病毒及慢病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染,是一種常用的促感染試劑,能夠顯著提高病毒與細(xì)胞的接觸及感染效率。




07/注意事項(xiàng)


1. Polybrene對(duì)某些細(xì)胞(如末端分化的神經(jīng)元、DC 細(xì)胞)毒性較大,初次應(yīng)用建議先做毒性測(cè)試。

2. 本說(shuō)明書中提供的Polybrene使用濃度范圍僅供參考,具體使用濃度請(qǐng)參考相關(guān)文獻(xiàn)。

3. 為了您的健康安全,請(qǐng)規(guī)范操作,穿戴實(shí)驗(yàn)服與手套開展實(shí)驗(yàn)。

4. 所有慢病毒操作均需在BSL2級(jí)生物安全柜中進(jìn)行。

5. 本產(chǎn)品僅供科研使用,請(qǐng)勿用于臨床診斷及治療。




08/實(shí)驗(yàn)案例分析


1. 提前一天使用10 cm細(xì)胞培養(yǎng)皿培養(yǎng)ViralStars Lentivirus Packaging Cell Line(CL110001),待細(xì)胞密度為75% 左右開始包裝慢病毒。

2. 使用ViralStars LP Lentivirus Packaging Kit(LP110-10)進(jìn)行慢病毒包裝。取10 μL慢病毒包裝輔助質(zhì)?;旌衔铮≒ackage Plasmid Mix)加入到2 mL離心管中,加入2.5 μL表達(dá)GFP 的對(duì)照質(zhì)粒(Control Plasmid),輕輕混合,加入32 μL PolyShooter轉(zhuǎn)染試劑與質(zhì)粒混合,室溫孵育3分鐘。

3. 往上述混合物中加入1.8 mL無(wú)血清無(wú)雙抗的DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基,輕輕混勻,在室溫下靜置30分鐘,形成轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物。

4. 將上述1.8 mL轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物輕輕地逐滴均勻加入10 cm皿慢病毒包裝細(xì)胞中,輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)皿混勻,置于37℃,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)產(chǎn)毒。


5. 轉(zhuǎn)染24 h后,棄去初始病毒上清液,加入10 mL新鮮的*培養(yǎng)基(DMEM +10% FBS)至10 cm細(xì)胞培養(yǎng)皿中,置于37℃,5% CO2培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。


6. 轉(zhuǎn)染48 h后,收集病毒上清液,再加入10 mL新鮮的*培養(yǎng)基(DMEM +10% FBS)至10 cm細(xì)胞培養(yǎng)皿中,置于37℃,5% CO2培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。


7. 轉(zhuǎn)染72 h后,進(jìn)行二次病毒上清液收集,與48 h收集的上清液混合后,300xg離心10分鐘以除去細(xì)胞碎片,0.22 μm濾器過(guò)濾,使用ViralStars LC Lentivirus Concentration Solution慢病毒濃縮試劑盒(LC110R)進(jìn)行20倍濃縮,使用1 mL ViralStars LS Lentivirus Storage Solution(LS110R)重懸慢病毒顆粒。

8. 使用上述制備的慢病毒感染目的細(xì)胞HEK293T,設(shè)置兩組實(shí)驗(yàn)組: (1) 病毒+polybrene (10 μg/mL)+培養(yǎng)基混合液,(2) 病毒+培養(yǎng)基混合液(不添加polybrene)。

9. 使用熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白表達(dá)情況,并拍照記錄。使用流式細(xì)胞術(shù)統(tǒng)計(jì)GFP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù),實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2所示。


Polybrene 聚凝胺 10mg/mL


圖2: 慢病毒(GFP)感染目的細(xì)胞HEK293T的過(guò)程中是否添加polybrene (10 μg/mL)的感染效率對(duì)比實(shí)驗(yàn)。



09/其他相關(guān)產(chǎn)品


Polybrene 聚凝胺 10mg/mL

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