傳代方法概述
1.消化傳代:
棄去培養(yǎng)基,PBS潤洗一次后加入適量胰酶晃勻(以蓋住細(xì)胞表面為宜),放入培養(yǎng)箱消化。細(xì)胞呈斑片狀時加入等體積新鮮全培養(yǎng)基終止消化。吹打細(xì)胞后轉(zhuǎn)移懸液至潔凈離心管,600g離心5分鐘。棄去上清,用新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞至培養(yǎng)瓶,補足培養(yǎng)液體積,移入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
2.直接傳代:
用吸管吸取細(xì)胞懸液的1/2~1/4至另一瓶中;加入適量的新鮮培養(yǎng)基,補足培養(yǎng)液體積,培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。
3.離心傳代:
將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi),600 g 離心 5 min,棄去上清。使用新鮮的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞至新的培養(yǎng)瓶,補足培養(yǎng)液體積,培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。
細(xì)胞凍存注意事項
細(xì)胞凍存步驟:
使用上述傳代步驟至離心后,棄去培養(yǎng)基,用600μL~1mL凍存液重懸細(xì)胞后,轉(zhuǎn)移細(xì)胞至凍存管。
無血清凍存液可直接凍于-80,否則采取梯度降溫法凍存。
含血清凍存液成分:20%FBS、10%DMSO、70%1640培養(yǎng)液
細(xì)胞凍存需注意:
● 細(xì)胞數(shù)量過少可能導(dǎo)致復(fù)蘇困難,應(yīng)至少有5*105。
● 凍存時應(yīng)處于對數(shù)生長期,狀態(tài)不佳的細(xì)胞復(fù)蘇困難。
● 盡量采用梯度降溫并使用梯度降溫盒。
● 凍存的細(xì)胞不可直接移入液氮,應(yīng)-80凍存超過6小時后再液氮凍存。
● 凍存和復(fù)蘇的時間間隔不宜過短,不可小于三天。