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jenabioscience:高保真生物素16 PCR標(biāo)記試劑盒

簡要描述:jenabioscience:高保真生物素16 PCR標(biāo)記試劑盒 貨號:APP-101-BIO16
PCR法制備生物素16標(biāo)記的DNA探針
上海牧榮生物科技有限公司專業(yè)銷售進(jìn)口品牌實驗室產(chǎn)品

  • 產(chǎn)品型號:APP-101-BIO16
  • 廠商性質(zhì):代理商
  • 更新時間:2024-10-16
  • 訪  問  量:149

詳細(xì)介紹

品牌其他品牌貨號APP-101-BIO16
供貨周期現(xiàn)貨應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥

jenabioscience:高保真生物素16 PCR標(biāo)記試劑盒  貨號:APP-101-BIO16

PCR法制備生物素16標(biāo)記的DNA探針

Jena Bioscience由Max-Planck-Institute of Molecular Physiology(Dortmund)的一組科學(xué)家于1998年成立,利用超過25年的學(xué)術(shù)知識為100多個國家的研究和行業(yè)客戶開發(fā)創(chuàng)新試劑。

jenabioscience:高保真生物素16 PCR標(biāo)記試劑盒

供一般實驗室使用。

運(yùn)輸:凝膠包裝運(yùn)輸

儲存條件:儲存在-20°C
避免冷凍/解凍循環(huán)

保質(zhì)期:12個月

描述:
高保真生物素16 PCR標(biāo)記試劑盒設(shè)計用于通過PCR隨機(jī)產(chǎn)生生物素16修飾的DNA探針。這種探頭非常適合于原地的雜交和Northern印跡實驗。如果模板量有限或需要擴(kuò)增特定的DNA片段,基于PCR的標(biāo)記優(yōu)于Klenow片段的隨機(jī)引物標(biāo)記。

使用優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液和高保真聚合酶,生物素-16-dUTP作為其天然對應(yīng)物dTTP的替代物被有效地整合到DNA中。50 %生物素-16-dUTP取代通常導(dǎo)致反應(yīng)和標(biāo)記效率之間的最佳平衡。然而,生物素-16-dUTP/dTTP比率的個體優(yōu)化可以容易地用單核苷酸形式實現(xiàn)。所得生物素16-修飾的DNA探針隨后可通過HRP-或AP-修飾的鏈霉親和素檢測。

該試劑盒包含足夠的試劑用于175個標(biāo)記反應(yīng),每個反應(yīng)20μl(50%生物素16-dUTP替代,100微米dATP/dGTP/dCTP,50微米dTTP,50微米生物素16-dUTP)。

內(nèi)容:
高保真聚合酶
在含有50%甘油(v/v)的儲存緩沖液中
1個200微升(500個單位,2.5個單位/微升)

高保真標(biāo)記緩沖液
1個500微升(10倍)

dATP溶液
1個20微升(100毫米)

dGTP解決方案
1個20微升(100毫米)

dCTP溶液
1個20微升(100毫米)

dTTP溶液
1個20微升(100毫米)

生物素-16-dUTP
1個200微升(1毫米)


DNA
1個20微升(100納克/微升)

500 bp正向引物
1個20微升(10微米)

500 bp反向引物
1個20微升(10微米)

PCR級水
1x 1.2毫升

由用戶提供
DNA模板
底漆
DNA純化工具(可選)

1.工作溶液的制備

1.1 1mM dATP/dCTP/dGTP工作溶液的制備

  • 將100 mM dATP、100 mM dCTP和100 mM dGTP溶液在冰上、voretex上解凍,并短暫旋轉(zhuǎn)。
  • 用PCR級水制備1:100的稀釋液,以達(dá)到1 mM的最終濃度(例如2μl 100mM dATP+2μl 100mM dCTP+2μl 100mM dGTP+194μl PCR級水)。
  • 1 mM ATP/CTP/GTP工作溶液可儲存在-20°c下。準(zhǔn)備等分試樣以避免冷凍/解凍循環(huán)。

1.2 1mM dTTP工作溶液的制備

  • 在冰上融化100 mM dTTP溶液,voretex并短暫旋轉(zhuǎn)。
  • 用PCR級水制備1:100的稀釋液,以達(dá)到1 mM的最終濃度(例如2 μl 100 mM dTTP + 198 μl PCR級水)。
  • 1 mM dTTP工作液可儲存在-20°c下。準(zhǔn)備等分試樣以避免冷凍/解凍循環(huán)。

3.標(biāo)準(zhǔn)PCR標(biāo)記方案

標(biāo)準(zhǔn)方案用于標(biāo)記500 bp的DNA片段。反應(yīng)和標(biāo)記效率之間的最佳平衡通常是按照下面的標(biāo)準(zhǔn)方案用50%生物素-16-dUTP取代來實現(xiàn)的,然而,個體優(yōu)化可能會改善個體應(yīng)用的結(jié)果。

  • 按照下列順序在冰上組裝PCR(無脫氧核糖核酸酶反應(yīng)管)。
  • Voretex和簡單的降速。


成分最終概念
PCR級水X μl
高保真緩沖器(10倍)2微升1x
1 mM dATP/dCTP/ dGTP工作溶液(s. 1.1)2微升100微米
1 mM dTTP工作溶液(s. 1.2)1微升50微米
1 mM生物素-16-dUTP1微升50微米
正向引物
(10微米)
X μl0.1 - 1微米(例如0.3微米500 bp正向引物)
反向引物
(10微米)
X μl0.1 - 1微米(例如0.3微米500 bp反向引物)
模板dnaX μl1 - 10 ng基因組DNA(例如1 ngλDNA)
高保真度Pol (2.5單位/微升)1微升2.5單位
總體積20微升



推薦的騎行條件

循環(huán)步驟溫度時間周期
最初的
變性
95攝氏度2分鐘1x
變性
熱處理1)
延長2)
95攝氏度
58攝氏度
68攝氏度
20秒
30秒
60秒
30x
最后的
延長
68攝氏度2分鐘1x


1)退火溫度取決于所用引物的熔化溫度。
2)延伸時間取決于待擴(kuò)增片段的長度。建議時間為2分鐘/kbp。72°C時的伸長率也同樣有效。


為了獲得最佳擴(kuò)增結(jié)果和高摻入率,對于每個新的引物-模板對,可能需要對推薦的PCR檢測和循環(huán)條件進(jìn)行單獨優(yōu)化。


4.探針純化:

大多數(shù)雜交實驗不需要探針純化。如果下游應(yīng)用需要純化(例如通過吸光度測量進(jìn)行濃度測定),我們建議采用基于硅膠膜或凝膠過濾的純化方法。




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  1. 國內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理。

  2. 國外試劑的訂購??商峁W美實驗室品牌的采購方案。

  3. 提供加急物流處理,進(jìn)口貨物,最快交期1-2周。

  4. 進(jìn)出口貨物代理服務(wù)。

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  6. 質(zhì)量保證,所有產(chǎn)品都提供售后服務(wù)。付款方式靈活。公司堅持“一站式"服務(wù)模式,為客戶全面解決實驗、生產(chǎn)、開發(fā)需求。公司整合國際與國內(nèi)資源,加強(qiáng)網(wǎng)絡(luò)建設(shè),提高公司內(nèi)部運(yùn)作效率,為客戶提供方便、快捷的服務(wù)。

  7. 公司突出創(chuàng)新思維,提高工作效能,減低運(yùn)作成本,為客戶提供優(yōu)惠的價格。


jenabioscience:高保真生物素16 PCR標(biāo)記試劑盒  貨號:APP-101-BIO16





















































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