jenabioscience:生物素蛋白標記試劑盒——蛋白質(zhì)生物素化試劑盒

Jena Bioscience由Max-Planck-Institute of Molecular Physiology(Dortmund)的一組科學家于1998年成立，利用超過25年的學術(shù)知識為100多個國家的研究和行業(yè)客戶開發(fā)創(chuàng)新試劑。

供一般實驗室使用。

運輸:凝膠包裝運輸

儲存條件:儲存在-20°C
避免冷凍/解凍循環(huán)

保質(zhì)期:12個月

描述:
親和素、鏈霉親和素或NeutrAvidin與生物素的結(jié)合是已知*強的生物相互作用，解離常數(shù)在10范圍內(nèi)-15米（meter的縮寫））
維生素生物素可以與許多蛋白質(zhì)結(jié)合，而不會因生物素分子的小尺寸而喪失其生物活性。生物素化探針通常由抗生物素蛋白、鏈霉抗生物素蛋白或NeutrAvidin檢測，攜帶報告基團，例如辣根過氧化物酶(HRP)或熒光標記。
感興趣的蛋白質(zhì)(POI)通常在不同的位置被生物素化。每個結(jié)合的生物素結(jié)合一個抗生物素蛋白、鏈霉抗生物素蛋白或NeutrAvidin分子，導致信號放大。
生物素和生物素結(jié)合蛋白之間的相互作用用于各種應用，如親和層析、熒光激活細胞分選(FACS)、ELISA和蛋白質(zhì)印跡。
該蛋白質(zhì)生物素化試劑盒包含對5毫克POI進行5次單獨標記反應所需的所有試劑。

內(nèi)容:
生物素NHS-酯
5瓶，每瓶含1毫克

二甲基甲酰胺
500微升

碳酸氫鈉
1瓶含168毫克

超純水
2毫升

儲存和穩(wěn)定性:
收到后，將生物素儲存在-20°c下。其他成分可儲存在室溫下。如果按照建議儲存，Jena Bioscience保證該產(chǎn)品在12個月內(nèi)保持最佳性能。

協(xié)議:
一般注意事項
蛋白質(zhì)濃度應該至少為2 mg/ml，更高的濃度-高達10 mg/ml -是優(yōu)選的，因為低濃度會影響標記效率。我們建議每個標記反應使用大約5毫克蛋白質(zhì)。
含有伯胺如Tris和甘氨酸的緩沖液不適用于標記反應，必須在開始標記反應前用合適的不含胺的緩沖液如PBS、MES或HEPES替換。

實驗協(xié)議

• 加入2 ml超純水溶解碳酸氫鈉。得到的1 M溶液在4°C下至少穩(wěn)定2周。
• 向蛋白質(zhì)溶液中加入適量的碳酸氫鈉(1 M ),使最終濃度達到100 mM
• 從冰箱中取出一個生物素小瓶，并在打開前將其平衡至室溫。通過添加100 μl DMF制備生物素，使?jié)舛冗_到10 mg/ml。渦旋直至生物素*全溶解！在使用前準備好溶液！
• 將500 μl蛋白質(zhì)溶液(10 mg/ml)和溶解的生物素加入適當?shù)男∑恐?。小心渦旋并短暫離心，收集試管底部的反應混合物。
• 室溫下在搖床中培養(yǎng)一小時。
• 使用標準凝膠過濾柱如Sephadex G-25或類似物純化綴合物?；蛘撸坞x生物素可以通過透析或適當?shù)男D(zhuǎn)濃縮器從綴合物中分離出來。

  
  請注意，該套件不提供蛋白質(zhì)純化材料！

• 用SDS-PAGE分析你的結(jié)合物。

結(jié)合物的儲存
像未標記的蛋白質(zhì)一樣儲存結(jié)合物。我們建議將溶液分成小份，并在-20°C或-80°C下冷凍。避免反復冷凍和解凍！

故障排除:
低生物素化效率

• 蛋白質(zhì)溶液的濃度

  
  

  該分析被優(yōu)化用于標記濃度為10 mg/ml的5 mg蛋白質(zhì)。

  
  

  生物素化的效率強烈依賴于濃度，并且在不同的蛋白質(zhì)之間有所不同。因此，在每一種情況下，優(yōu)化可能是獲得最佳生物素化所必需的。
• 緩沖成分

  
  

  含有伯胺(甚至微量)的蛋白質(zhì)溶液會顯著降低生物素化效率。確保你的蛋白質(zhì)被充分透析，以防它與含胺物質(zhì)接觸。
• pH值的影響

  
  

  檢查你的蛋白質(zhì)溶液的pH值！參考范圍是8.2 - 8.5。

  
  

  蛋白質(zhì)的伯氨基不能被質(zhì)子化而具有活性，因此，蛋白質(zhì)溶液的pH值必須足夠高。另一方面，NHS酯的水解速率隨著溶液pH值的增加而增加，從而產(chǎn)生非反應性生物素。最佳生物素化結(jié)果已在pH 8.3獲得。

  
  

  在pH值較低的強緩沖蛋白質(zhì)溶液中，100 mM碳酸氫鈉可能不足以將pH值提高到最佳值。您可以添加更多的碳酸氫鈉，直到達到最佳pH值。

請注意，生物素化效率不僅取決于環(huán)境條件，還取決于蛋白質(zhì)特性。蛋白質(zhì)表面的三級結(jié)構(gòu)和由此產(chǎn)生的賴氨酸數(shù)量以及等電點和蛋白質(zhì)在pH 8.3下的行為起作用。

相關(guān)產(chǎn)品

生物素-X蛋白標記試劑盒 FP-321

生物素-XX蛋白標記試劑盒 FP-322

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