品牌 | 其他品牌 | 貨號(hào) | K61010 |
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥 |
MagVigen™ Whole Blood, PBMC or Cell Genomic DNA Extraction Kit
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產(chǎn)品內(nèi)容
- mag vigen DNA捕獲納米顆粒
- 裂解緩沖液
- 洗滌緩沖液
- 洗脫緩沖液
- 蛋白酶K溶液
需要但不包括的材料
- 磁性架(NVIGEN目錄號(hào)A20006)
- 異丙醇(分子生物學(xué)級(jí))
- 乙醇(200度)
- 美國(guó)公共廣播公司
協(xié)議
注意:
- 制備清洗緩沖溶液:在每550 μl清洗緩沖儲(chǔ)備液中加入450 μl異丙醇,制成清洗緩沖液。
- 使用前充分渦旋珠子。
- 以下方案使用150 μl作為提取起始體積。對(duì)于其他體積,請(qǐng)按比例縮放每個(gè)步驟中使用的試劑。
- 將150 μl樣品轉(zhuǎn)移到1.5ml Eppendorf試管中。如果樣品量較少,加入PBS補(bǔ)足體積。對(duì)于全血樣品,即從60 μl或75 μl樣品開(kāi)始,用等體積的PBS稀釋。
- 加入5 μl蛋白酶K溶液,加入150 μl細(xì)胞裂解緩沖液。輕輕混合均勻,并在55℃下孵育30分鐘
- 向裂解緩沖液中加入5μl MagVigen DNA捕獲納米顆粒。渦旋混合均勻。向裂解反應(yīng)中加入300 μl異丙醇,渦旋混合。室溫下孵育20分鐘。
- 將樣本管放在磁性架上沉淀珠子,直到溶液澄清(約5分鐘)。慢慢取出并丟棄上清液。注意不要帶走任何珠子,盡可能多地移除溶液。
- 從磁鐵上取下樣本管,加入150 μl清洗緩沖液。通過(guò)移液或倒置混合。短暫旋轉(zhuǎn),使溶液到達(dá)試管底部。在磁性架上沉淀珠子,直到溶液澄清(大約1-3分鐘),然后去除上清液并丟棄。
- 添加150μl 80%乙醇(清洗2),通過(guò)移液混合。短暫旋轉(zhuǎn),使溶液到達(dá)試管底部。在磁性架上沉淀珠子,等到溶液澄清,去除上清液并丟棄。
- 重復(fù)步驟6,用80%乙醇再次清洗(清洗3)。
- 將樣本管放在磁性架上,風(fēng)干顆粒約1分鐘。
- 向珠子中加入50 μl洗脫緩沖液,并充分混合。室溫下孵育1分鐘。
- 將樣本管放置在磁性支架上1-2分鐘。小心地從Eppendorf管底部收集洗出液,不要擾動(dòng)沉淀。
- 重復(fù)步驟9和10進(jìn)行另一次洗脫。洗出液含有提取的DNA。
注意: 對(duì)于要求高樣品清潔度的下游應(yīng)用,將樣品放在磁鐵旁邊,以消除殘留珠子的可能性。
表1。每個(gè)步驟中使用的試劑體積。
名字 | 體積(微升) | 體積(微升) |
樣品(全血、PBMC層或分散在PBS中的細(xì)胞) | 120 | 150 |
蛋白酶K溶液 | 4 | 5 |
裂解緩沖液 | 120 | 150 |
磁珠 | 3.2 | 4 |
異丙醇 | 240 | 300 |
清洗緩沖液(清洗1) | 120 | 150 |
新鮮的80%乙醇(清洗2和3) | 120 x 2 | 150 x 2 |
洗脫緩沖液,2X | 40 x 2 | 50 x 2
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MagVigen™ Whole Blood, PBMC or Cell Genomic DNA Extraction Kit