簡要描述:PolyShooter siRNA/miRNA 轉(zhuǎn)染試劑,產(chǎn)品編碼:P09410。它有兩種規(guī)格:5ML、1ML。是一種基于陽離子高分子聚合物的新型轉(zhuǎn)染試劑,適用于siRNA和miRNA的轉(zhuǎn)染,對(duì)多種常見細(xì)胞具有高水平轉(zhuǎn)染效率,具有高效低毒、操作簡單、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn),適用siRNA/miRNA介導(dǎo)的基因抑制實(shí)驗(yàn)。
詳細(xì)介紹
品牌 | 其他品牌 | 貨號(hào) | P09410 |
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),綜合 |
PolyShooter siRNA/miRNA 轉(zhuǎn)染試劑,產(chǎn)品編碼:P09410。
PolyShooter siRNA/miRNA 轉(zhuǎn)染試劑
PolyShooterTM INTERFERE
Transfection Reagent
Catalog Number:P09410
01/產(chǎn)品概述
RNA干擾(RNAinterference,RNAi)是近年來生命科學(xué)領(lǐng)域十分重大的發(fā)現(xiàn)之一,它是指小分子雙鏈RNA可以特異性地降解同源mRNA,從而抑制或關(guān)閉特定基因表達(dá)的現(xiàn)象。人們只要知道了某種疾病的致病基因,就可以設(shè)計(jì)出針對(duì)該基因mRNA的小分子干擾RNA(SmallinterferingRNA,siRNA),抑制或封閉該致病基因的表達(dá),從而達(dá)到治療疾病的目的。由于使用RNAi技術(shù)可以特異性剔除或關(guān)閉特定基因的表達(dá),所以該技術(shù)已被廣泛用于探索基因功能和傳染性疾病及惡性腫瘤等基因治療領(lǐng)域。RNAi是目前尤為熱門的生命科學(xué)研究領(lǐng)域,也是未來有發(fā)展前途的新藥開發(fā)領(lǐng)域。除此之外,RNAi技術(shù)還可以廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、林業(yè)、畜牧業(yè)和漁業(yè)等多種領(lǐng)域,進(jìn)行良種培育、良種篩選和疾病治療等。
siRNA/miRNA導(dǎo)入有以下幾種方法∶化學(xué)轉(zhuǎn)染技術(shù)、電穿孔法、磷酸鈣共沉淀技術(shù)、顯微注射和載體導(dǎo)入技術(shù)。由于電轉(zhuǎn)的方法對(duì)細(xì)胞損傷比較大,一般不建議選擇電轉(zhuǎn)。化學(xué)轉(zhuǎn)染技術(shù)是目前最為常用的方法,化學(xué)轉(zhuǎn)染能否成功的關(guān)鍵在于轉(zhuǎn)染試劑的選擇。
PolyShooter siRNA/miRNA 轉(zhuǎn)染試劑 P09410,即PolyShooter INTERFERE Transfection Reagent是一種基于陽離子高分子聚合物的新型轉(zhuǎn)染試劑,適用于siRNA和miRNA的轉(zhuǎn)染。其原理為帶正電的高分子聚合物與siRNA/miRNA帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成帶正電的復(fù)合物后,與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用,并通過內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞,形成內(nèi)含體。該轉(zhuǎn)染試劑具有質(zhì)子海綿的作用,能夠吸收溶酶體中的H+,質(zhì)子的不斷流入導(dǎo)致復(fù)合體腫脹破裂,從而使外源siRNA或miRNA釋放到細(xì)胞質(zhì)中,實(shí)現(xiàn)siRNA/miRNA的細(xì)胞轉(zhuǎn)染。
PolyShooter siRNA/miRNA 轉(zhuǎn)染試劑 P09410 對(duì)多種常見細(xì)胞具有高水平轉(zhuǎn)染效率,具有高效低毒、操作簡單、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn),適用siRNA/miRNA介導(dǎo)的基因抑制實(shí)驗(yàn)。其*的配方使其轉(zhuǎn)染后無明顯細(xì)胞毒性,因此無需去除轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物或更換新鮮培養(yǎng)基,也可根據(jù)具體情況優(yōu)化轉(zhuǎn)染體系。
02/產(chǎn)品組分
組分 | P09410-01 | P09410-05 |
PolyShooter INTERFERE Transfection Reagent | 1 mL/支 | 1 mL x 5支 |
03/保存條件
冰袋(wetice)運(yùn)輸。4℃保存,有效期6個(gè)月。-30℃至-10℃保存,有效期12個(gè)月,避免反復(fù)凍融。
04/產(chǎn)品特點(diǎn)
轉(zhuǎn)染效率高——針對(duì)廣泛類型的細(xì)胞,均表現(xiàn)出優(yōu)秀的轉(zhuǎn)染效率,基因抑制效果好,脫靶效應(yīng)低
細(xì)胞毒性低——作用溫和,能較好地實(shí)現(xiàn)高轉(zhuǎn)染效率與低細(xì)胞毒性之間的平衡
適用范圍廣——可用于多種細(xì)胞類型,適合siRNA/miRNA介導(dǎo)的基因抑制實(shí)驗(yàn)
操作簡單——簡單快速的實(shí)驗(yàn)方案,可獲得穩(wěn)定的結(jié)果,且轉(zhuǎn)染后無需去除復(fù)合物或更換新鮮培養(yǎng)基
05/適用范圍
LeapWal PolyShooter siRNA/miRNA 轉(zhuǎn)染試劑是一種基于陽離子高分子聚合物的新型轉(zhuǎn)染試劑,適用于siRNA和miRNA的轉(zhuǎn)染。
06/實(shí)驗(yàn)流程概要
07/實(shí)驗(yàn)步驟(以24孔板為例,其他培養(yǎng)板加樣體積參考表一:轉(zhuǎn)染量度標(biāo)準(zhǔn))
1: 準(zhǔn)備待轉(zhuǎn)染細(xì)胞
貼壁細(xì)胞:轉(zhuǎn)染前一天,將胰酶消化后的細(xì)胞按照每孔0.1-1x105個(gè)細(xì)胞的量進(jìn)行鋪板,使其在轉(zhuǎn)染時(shí)密度為30%-40%。
懸浮細(xì)胞:轉(zhuǎn)染當(dāng)天,配制轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物之前,在24孔板中進(jìn)行細(xì)胞鋪板,每500 µL生長培養(yǎng)基中加入0.5-2.5x105個(gè)細(xì)胞。
? 細(xì)胞狀態(tài)會(huì)極大影響轉(zhuǎn)染效率,待轉(zhuǎn)染細(xì)胞應(yīng)處于良好生長狀態(tài),建議使用生長處于指數(shù)期、存活率大于90% 的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。
2: 準(zhǔn)備PolyShooterTM INTERFERE轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物
(1)取1 μL siRNA (20 μM,DEPC水溶解) 加入到1.5 mL離心管中,加入2 μL PolyShooterTM INTERFERE轉(zhuǎn)染試劑與siRNA混合,室溫孵育3分鐘。
? 基因性質(zhì)、細(xì)胞類型、siRNA效價(jià)、靶mRNA的半衰期和靶蛋白的周轉(zhuǎn)率等因素均會(huì)影響siRNA的轉(zhuǎn)染效率,建議選取siRNA作用濃度在10-100 nM之間,轉(zhuǎn)染試劑的體積應(yīng)根據(jù)siRNA濃度和培養(yǎng)皿的大小進(jìn)行調(diào)整,請(qǐng)參見表一。
(2)往上述混合物中加入100 μL Opti-MEMTM I減血清培養(yǎng)基(無血清無雙抗),輕輕混勻,在室溫下靜置30分鐘,形成轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物。
3: siRNA細(xì)胞轉(zhuǎn)染
30分鐘后,將上述100 µL轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物加入每孔細(xì)胞,輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)板混勻。
4. 分析轉(zhuǎn)染細(xì)胞的基因干擾效率
轉(zhuǎn)染細(xì)胞培養(yǎng)24-48小時(shí)后,可根據(jù)實(shí)際情況用RT-PCR、Western Blot、ELISA、熒光檢測法、流式細(xì)胞術(shù)、報(bào)告基因等檢測基因干擾效果,或進(jìn)行后續(xù)功能實(shí)驗(yàn)。
? 該轉(zhuǎn)染試劑也適合轉(zhuǎn)染miRNA,具體操作請(qǐng)參考siRNA的操作流程。
表一:轉(zhuǎn)染量度標(biāo)準(zhǔn)
細(xì)胞培養(yǎng)裝置 | 生長培養(yǎng)基體積 (mL) | siRNA(20μM) (μL) | 轉(zhuǎn)染試劑(μL) | Opti-MEMTM I 減血清培養(yǎng)基體積 (μL) |
96孔板 | 0.1 | 0.2 | 0.4 | 20 |
24孔板 | 0.5 | 1 | 2 | 100 |
12孔板 | 1 | 2 | 4 | 200 |
6孔板 | 2 | 4 | 8 | 400 |
60 mm培養(yǎng)皿 | 4 | 8 | 16 | 800 |
100 mm培養(yǎng)皿 | 10 | 20 | 40 | 2000 |
08/注意事項(xiàng)
1.核酸質(zhì)量:確保siRNA/miRNA是經(jīng)過PAGE純化和脫鹽處理的,高純度的siRNA/miRNA有助于獲得較高的轉(zhuǎn)染效率。
2.細(xì)胞質(zhì)量:細(xì)胞狀態(tài)會(huì)極大影響轉(zhuǎn)染效率,建議使用生長處于指數(shù)期、存活率大于90%的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。
3.細(xì)胞密度:建議細(xì)胞傳代后12-24h內(nèi)、細(xì)胞密度為30%-40%時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染。不同的細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn),對(duì)細(xì)胞密度的要求不盡相同。在進(jìn)行不同核酸或不同細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染時(shí),需要根據(jù)說明書再次優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件。此外,在實(shí)驗(yàn)過程中保證相同的接種條件,確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可重復(fù)性。
4. siRNA與轉(zhuǎn)染試劑使用比例:對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞系而言,轉(zhuǎn)染復(fù)合物中siRNA (μL of 20 μM Stock)與PolyShooterTM INTERFERE Transfection Reagent (μL) 的比例在1:1至1:3之間,推薦比例為1:2。想要獲得理想的基因干擾結(jié)果,需要對(duì)這一比例進(jìn)行優(yōu)化,根據(jù)所轉(zhuǎn)染細(xì)胞及siRNA選擇適合的轉(zhuǎn)染比例。
5. 由于一些特殊培養(yǎng)基中的某些成分可能會(huì)抑制陽離子聚合物介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染,因此有必要檢測特殊培養(yǎng)基與PolyShooterTM INTERFERE Transfection Reagent的相容性。
6. 轉(zhuǎn)染前,確保siRNA/miRNA基因沉默表達(dá)不會(huì)影響細(xì)胞活力。
7. 您需要設(shè)計(jì)針對(duì)目的基因的若干siRNA(小干擾RNA),并評(píng)估其效價(jià)。
8. 整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程使用無RNA酶和無熱原性的材料,如離心管、槍頭、緩沖液。
9. 為了您的健康安全,請(qǐng)規(guī)范操作,穿戴實(shí)驗(yàn)服與手套開展實(shí)驗(yàn)。
10. 本產(chǎn)品僅供科研使用,請(qǐng)勿用于臨床診斷及治療。
09/實(shí)驗(yàn)案例分析
1: 轉(zhuǎn)染前一天,將穩(wěn)定表達(dá)GFP的HeLa細(xì)胞接種于24孔板,使其在轉(zhuǎn)染時(shí)密度為30%。
2: 按照每孔計(jì)量,取1μL siRNA(GFP/NC, 20 μM)加入到1.5 mL離心管中,再加入2 μL PolyShooterTM INTERFERE Transfection Reagent與siRNA進(jìn)行混合,室溫孵育3 min。
3: 往上述混合物中加入100 μL Opti-MEMTM I減血清培養(yǎng)基(不含血清不含雙抗),輕輕混勻,在室溫條件下靜置30 min,形成PolyShooterTM INTERFERE轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物。
4: 30分鐘后,將上述100 µL轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物加入每孔細(xì)胞,輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)板混勻。
5: siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞24小時(shí)后,用熒光顯微鏡及流式細(xì)胞儀檢測GFP綠色熒光蛋白干擾效果,實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2所示。
6: 說明:此次實(shí)驗(yàn)選擇商業(yè)化的 siRNA轉(zhuǎn)染試劑RNAiMAX作為對(duì)照組,RNAiMAX的具體實(shí)驗(yàn)操作按照其說明書進(jìn)行。簡單來說:在不含抗生素的50 μL 無血清Opti-MEM 培養(yǎng)基中稀釋1μL siRNA(GFP, 20 μM),輕輕混勻。然后,在不含抗生素的50 μL 無血清Opti-MEM 培養(yǎng)基中稀釋1μL RNAiMAX,輕輕混勻。將稀釋的siRNA與稀釋的RNAiMAX輕輕混合,在室溫下孵育20分鐘。將混合物添加到細(xì)胞中,其終體積為600μL。siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞24小時(shí)后,用熒光顯微鏡及流式細(xì)胞儀檢測GFP綠色熒光蛋白干擾效果。
圖2: siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞24 h后,熒光顯微鏡(A)及流式細(xì)胞儀(B)檢測GFP干擾效果
10/其他相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 |
PolyShooterTM Transfection Reagent | P09110-01 | 1 mL |
P09110-05 | 1 mL x 5支 | |
PolyShooterTM NEO-PEI Transfection Reagent | P09310-01 | 1 mL |
P09310-100 | 100 mL | |
P09310-500 | 500 mL | |
PolyShooterTM Protein Transfection Reagent | P19103-01 | 0.3 mL |
P19103-05 | 0.3 mL x 5支 |
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國外試劑的訂購。可提供歐美實(shí)驗(yàn)室品牌的采購方案。
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