該檢測試劑盒包含用于常規(guī)檢測蘇?;钚缘脑噭?。包含蘇?;瘶擞洠ㄈ送負洚悩嬅?I 蛋白),以便清晰地檢測反應。該測定已被證明適用于粗提物。強烈建議人 EI,活性 (Cat# P001;P006)、人 E II,活性 (Cat# P002;P011) 和人 SUMO I,活性 (Cat# P003;P012) 與該試劑盒一起使用。
K007 套件包含:
SAE I 和 SAE II(人類 EI)(目錄號 P006)
UBC9(人類 E II)(目錄號 P011)
SUMO I(主動形式)。 (目錄號 P012)
人類 DNA 拓撲異構酶 I 片段。 (目錄號 B007)
抗拓撲異構酶 I 抗體。 (目錄號 AP006)(凍干抗體應在使用前用 100 ul H 2 O 復溶。)
10X 蘇?;磻彌_液。 (目錄號 B006)(10x 緩沖液含有 200 mM Hepes pH 7.5、50 mM MgCl 2和 20 mM ATP。)
上述試劑適用于50次蘇?;磻?。
測定條件:
蘇酰化測定在含有20mM Hepes pH 7.5、5mM MgCl 2、2mM ATP的反應緩沖液中以20ul的終體積進行。我們建議添加新鮮的 2mM ATP 以確保提供足夠的能量。
拓撲異構酶 I 蘇?;刂品桨福?/strong>
添加 2 ul 50 kd 拓撲異構酶 I 片段(目錄號 B007)作為每個反應的底物。
在每個反應中,首先將 2 ul E2 添加到底物中,然后添加 2 ul Sumo-1、2ul 10x 反應緩沖液(目錄號 B006)、2ul E1 和 2 ul 20 mM ATP。最后,添加 H 2 O 使總體積達到 20 ul 。
LAE SUMO化蛋白的最佳反應濃度如下: 對照測定的推薦條件是37 ℃,30~60分鐘。
EI:7.5微克/毫升
E II:50微克/毫升
SUMO-1:50微克/毫升
使用 10 ml 中提供的拓撲異構酶 I 抗體(目錄號 AP006)稀釋 1000 倍進行蛋白質印跡。應檢測四個主要的SUMO化條帶。
使用 Topo-I 抗體(目錄號 AP006)對蘇酰化 50 Kd Topo-I 蛋白(目錄號 B007)進行蛋白質印跡(12.5% 凝膠)。泳道 1:sumoylated 50Kd Topo-I 片段;泳道 2:未蘇?;?50Kd Topo-I 片段。
Topo-I 抗體 ( Cat#AP006)可以檢測到至少四個主要的蘇?;?Topo-I 片段 。
蘇?;桨福?/span>
準備合適的純化底物蛋白。
在每個反應中,首先將 2 ul E2 添加到底物中,然后添加 2 ul Sumo-1、2 ul 10 x 反應緩沖液、2 ul E1 和 2 ul 20 mM ATP。最后,添加 H 2 O 使最終體積達到 20 ul。
LAE蛋白的最佳反應濃度如下:
EI:7.5微克/毫升
E II:50微克/毫升
SUMO-1:50微克/毫升
運輸/儲存:
該套件隨干冰一起運輸,應儲存在 -70 o C 或更低的溫度下。
法律考慮:僅供研究使用。
LAE BIO是一家有前途的生物技術公司,致力于制造和開發(fā)最高質量的 研究抗體和純化蛋白質。我們創(chuàng)新的 線性陣列表位 (LAE) 技術 與眾不同我們來自所有其他抗體制造商。這項新技術結合了受體介導的攝取和有效的抗原呈遞,以誘導免疫反應,產生針對任何抗原(包括自身抗原)的抗體。先進技術與多年的抗原制備和蛋白質純化經驗相結合,確保我們以實惠的價格提供優(yōu)質的抗體和蛋白質。
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