血清更換注意事項(xiàng)及步驟

一、推薦在復(fù)蘇時(shí)步驟：

1.首先準(zhǔn)備一只15ml離心管，加入3倍以上體積培養(yǎng)基（含10%澳范血清，1%青鏈霉素的適配培養(yǎng)基，具體培養(yǎng)基類型查詢ATCC）。

2.將需要復(fù)蘇的凍存管放于37℃水浴鍋中（液面沒過凍存液），并持續(xù)輕柔晃動凍存管，直至冰晶消失。

2.迅速轉(zhuǎn)移細(xì)胞至無菌操作臺，酒精棉球擦拭干凈凍存管表面后開蓋。

3.輕柔地將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至已經(jīng)準(zhǔn)備好的無菌離心管，800-1000g離心5min（不同離心機(jī)離心力不同，請選擇合適離心力），棄去上清，用上述培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，放入37℃，5%二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)。并隔天更換培養(yǎng)基。

二、對于對數(shù)生長期的細(xì)胞，推薦按梯度更換血清：

         將上述培養(yǎng)基與之前所使用培養(yǎng)基按1：1混勻后，采用換液法更換培養(yǎng)基。持續(xù)培養(yǎng)1代后更換為只含10%澳范血清的培養(yǎng)基。（其余所需物質(zhì)照常添加）

三、不推薦直接更換血清：

        可能導(dǎo)致細(xì)胞營養(yǎng)不良，形態(tài)變皺縮/纖細(xì)，代謝和活性相關(guān)表型改變。

血清儲存及化凍

儲存：在 -15°C到-20°C低溫冰箱血清的保存期限為5年。

解凍：第一步：從-40°C--80°C超低溫冰箱取出后需在 -20°C冰箱平衡48小時(shí)。

           第二步：立放與水平搖床并開啟搖床。若解凍血清的時(shí)候無法使用搖床則在室溫下融化，前半小時(shí)內(nèi)每隔5分鐘-10分鐘輕微晃動血清使其瓶底及瓶身周邊的纖粘蛋白融化。

4度冰箱解凍血清容易造成析出并丟失貼壁因子、會影響細(xì)胞的培養(yǎng)。

解析：血清中含有冷不溶蛋白較多如血清中纖粘蛋白（fibronection）屬于冷不溶蛋白，在4度解凍時(shí)，不會溶解，是以沉淀狀態(tài)在血清中。

           冰箱存在自動化霜功能，冰箱在化霜過程中箱體處于加熱狀態(tài)、貼近箱體底部及周邊儲存的試劑容易被溶解反復(fù)凍融影響質(zhì)量。實(shí)驗(yàn)室使用化霜冰箱的時(shí)候存放試劑時(shí)需避免直接存放在錫箔紙上面。